Técnicas de Biologia Molecular
Código
0101524Créditos ECTS
6Objetivos
A compreensão dos fundamentos teóricos das principais técnicas da biologia molecular, o emprego de técnicas de biologia molecular tanto no campo de pesquisa básica como na pesquisa aplicada, o reconhecimento da sua importância no estudo da variabilidade genética são meios imprescindíveis a todos aqueles que planeiam trabalhar na investigação quer na biologia molecular quer na genética molecular, e importante para o profissional biólogo em geral. São objetivos de aprendizagem desta disciplina:
1. Conhecer conceitos básicos e terminologias das principais técnicas da biologia molecular.
2. Descrever e compreender a aplicabilidade das principais técnicas de biologia molecular.
3. Executar as técnicas básicas de deteção e de análise de proteínas e de ácidos nucleicos, por forma abranger diversos níveis duma investigação em biologia molecular e genética.
4. Recolher e correlacionar a informação obtida e saber apresentar sob forma de relatório científico.
Programa
O conteúdo programático da disciplina está dividido por temas a desenvolver por uma ou mais aulas:
1. Cuidados gerais a ter na realização das práticas laboratoriais em biologia molecular
2. Familiarização com o equipamento básico e técnicas a utilizar
3. Métodos de extração de DNA (utilização de diferentes protocolos)
5. Quantificação de DNA (por espectrofotometria e eletroforese em gel de agarose).
6. Reação em cadeia da Polimerase (PCR). Amplificação do DNA através da técnica de PCR
7. Restrição do DNA amplificado (uso de enzimas de restrição)
8. Purificação de DNA para posterior sequenciação
9. Deteção de toxinas (SPATT, Elisa)
10. Sequenciação: técnicas e análise de sequências de DNA (leitura de géis de sequenciação), edição de sequências
Métodos de Ensino
Em cada aula de TBM, a hora teórico-prática é de caráter expositivo, com projeção de slides que introduzirão o tema a ser desenvolvido durante a aula, apresentarão o método e a técnica a desenvolver na componente prática. A componente laboratorial abrangerá uma série de experiências a desenvolver pelos estudantes, organizados em grupos, mediante o fornecimento de protocolos. Durante a realização das experiências, serão apresentados e discutidos os conceitos básicos e os termos relacionados às técnicas utilizadas. A primeira aula prática será dedicada integralmente ao manuseamento do equipamento básico a ser utilizado nas aulas seguintes. No início das aulas, serão dadas indicações sobre a bibliografia adequada e como realizar pesquisas sobre os temas. Os estudantes deverão elaborar, durante o semestre, um caderno/diário de laboratório, no qual constarão os protocolos e que servirá como guia de estudo.
Bibliografia
Carson, S., Miller, H. B., Srougi, M. C., & Witherow, D. S. (2019). Molecular biology techniques: a classroom laboratory manual. Academic Press.
Bartlett J.M.S. & Stirling D., 2003. PCR Protocols, 2nd Ed, Humana Press, New Jersey.
Hartl D. & E. W. Jones, 2009. Genetics. Analysis of genes and genomes, 9th Ed, Jones and Bartlett Publishers, Boston.
Lima N. & Mota M. (Ed), 2003. Biotecnologia: fundamentos e aplicações. Lidel – Edições Técnicas, Lda, Lisboa.
Ausubel F. M., et al. (Ed), 2002. Short Protocols in Molecular Biology: a compendium of methods from current protocols in Molecular Biology, 5th Ed (2 volumes), John Wiley & Sons, Inc., New Jersey.
Tagu D. & Moussard C., 2006. Techniques for Molecular Biology. Taylor and Francis Group, Science Publishers, New Hampshire.
Watson J.D., Baker T.A., Bell S.P. & Gann A. 2008. Molecular Biology of the Gene, 5th Ed, Pearson Benjamin Cummings